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      人胚腎細胞(293T)培養說明書
      點擊次數:4847 更新時間:2018-08-14

       

                                    人胚腎細(293T)

      貨號:HEMCL-033

       

      細胞介紹

      293細胞株插入SV40 T-抗原的溫度敏感基因后產生的高轉染效率的衍生株稱為293T。

       

      細胞特性

      1) 來源:胚胎,腎臟

      2) 形態上皮細胞

      3) 含量:>1x106 個/mL

      4) 污染:支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

      5) 規格:T75瓶或者1mL凍存管包裝

       

      運輸和保存:使用含有胎牛血清的2ml凍存管發送存活細胞。收到細胞后,1000RPM,常溫條件離心5min后潔凈操作臺棄去上清,加入推薦使用的培養基轉移至10cm培養皿或者T75培養瓶中培養傳代達到細胞生長狀態良好時,再進行凍存。具體操作見細胞培養步驟。

       

      細胞用途:僅供科研使用。

                             

      細胞培養步驟

      一.培養基培養凍存條件準備:

      1) 準備DMEM-H培養基(GIBCO,貨號1199500bt,添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。也可根據實驗需要選擇懸浮培養基,使293T細胞懸浮生長。

      2) 培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度培養箱濕度為70%-80%。

      3) 凍存液90%*培養基,10%DMSO現用液氮儲存。

      二. 細胞處理

      1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中加入8ml培養基,培養過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。

      2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%可進行傳代培養

      對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:

      1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子PBS潤洗細胞1-2

      2. 加2ml消化液0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)培養瓶中,置于37℃培養箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化

      3. 按6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。

      4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中

      3)細胞凍存:細胞生長狀態良好時,進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養基后加入少量胰酶,細胞變圓脫落后,加入約1ml血清的培養基后加入凍存管中,再添加10%DMSO進行凍存

       

      注意事項:

      1. 收到細胞后,若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯系

      2. 所有動物細胞均視為潛在的生物危害性必須在二級生物安全內操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

       

      無血清傳代培養

      小鼠小膠質細胞(BV2)培養說明書

      滬公網安備 31011802001676號

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