洗滌在ELISA過程中雖不是一個反應步驟，卻是決定成敗的關鍵。洗滌的目的是洗去反應液中沒有與固相抗原或抗體結合的物質以及在反應過程中非特異性吸附于固相載體的干擾物質。聚苯乙烯等塑料對蛋白質的吸附作用屬普遍性的，因此在ELISA測定的反應過程中應盡量避免非特異性吸附，在洗滌時應把這種非特異性吸附的干擾物質洗滌下來。

　　洗滌如不*，特別在后一次，如有酶結合物的非特異性吸附，將使空白值升高。另外，在間接法中如血清標本內的非特異性lgG吸附在固相上而未被洗凈，也將與酶標抗抗體作用而產生干擾。

　　ELISA板的洗滌一般可采用以下步驟:①吸干反應液;②將洗滌液注滿板孔;③放置2~3min，略作搖動;④吸干孔內液。也可傾去液體后在吸水紙上拍干。洗滌的次數一般為3~4次，有時甚至需洗5~6次。

　　洗滌方法可用手動或全自動沖洗，不論使用哪種方法，都要滿足下列條件:①每個孔都應充滿洗滌液；②每步沖洗后都要*去凈洗滌液；③沖洗次數要足夠；④足夠的浸泡時間。.

　　一般情況下，浸泡時間長和增加沖洗次數可以降低相對標準偏差(RSD)，但過度沖洗則降低陽性血清與陰性血清的吸光度比值，在自動沖洗時常有此種現象。當用自動注意沖洗器的管是否有堵塞。如果用自動或半自動沖洗器，在沖洗過程中可以觀察到酶標板，從而可以保證洗滌的效果。

　　洗滌液中的成分不同也會影響ELISA檢測結果。洗滌液可以是:（1）蒸餾水；（2）水+0.05%Tween20；（3）蒸餾水+0.5%BSA；（4）蒸餾水+0.05%Tween20+0.5%BSA。結果表明洗滌液中加Tween20和BSA時洗滌的效果相同，同時使用Tween20和BSA對檢測結果并無明顯改善，但僅用蒸餾水洗滌時會使弱陽性血清反應轉為陰性。