技術支持Article
酶活性檢測的實驗原理介紹
點擊次數：1320 更新時間：2022-12-21
為了檢測一種酶的催化活性，有必要首先鑒定從底物(S)到產物(P)轉化所包含的化學變化。迄今為止，在各種關于酶催化活性文章的相關論述中，最典型的分類方式是按照其所催化的化學反應的類型來進行的(如氧化-還原、基團轉移、消除、異構化、重排、縮合、竣化作用等)（FreyandHegeman，2007)。此外，還應該考慮是否存在機制相似的化學過程:①涉及小分子底物或大分子蛋白質或核酸;②在溶液中易于發生或需要膜結合組分才能進行;③逆反應進行到多大的程度。在任何情況下，酶的分析圍繞著以可計量的方式將給定底物和相關產物的理化性質進行區分的能力來設計。在很大程度上，類似的活性檢測方法已經應用于這些亞群中的各種酶。在以某種已有檢測方法為基礎來為下面兩類酶計檢測方法時要慎重，即不同物種來源的同源酶或催化相關化學反應的不同的酶。酶活性檢測的中心主題是確保初始速率的測定。為了重申這一要點，常見的和較好的做法是,在具有小于等于5%產物轉化的時間內測定反應物減少或產物生成的初始速率。這種做法可以給出在初始底物濃度條件下的接近起始反應速率的值。
酶的量或濃度可以用摩爾量表示，或者用酶單位的活性表示。
酶活力=每單位時間轉化的底物摩爾數=速率×反應體積。酶活性是存在的活性酶量的量度，取決于的條件。SI單位是katal，1 katal=1 mol/s，更實際的和常用的值是酶單位（U）=1μmol/min。1 U對應16.67 nanokatals。
酶的比活力是另一種常見的單位，代表酶的純度。用每毫克蛋白質所含的酶活力單位數來表示。比活力=活力U/mg蛋白。
反應的速率是每單位時間的底物消失（或產物生成）的濃度。
如果已知100％純酶的比活性，那么不純的樣品將具有較低的比活性，從而可以計算純度。
