SuperQuickRT cDNA*鏈合成試劑盒說明書

SuperQuickRT cDNA Kit

（For Real-time PCR）

SuperQuickRT cDNA*鏈合成試劑盒

（For Real-time PCR）

目錄號：YJ2381

保存條件：-20℃。

規格說明

     Cat. No.                            YJ2381B      YJ2381

     Kit Size                                25         100

     SuperQuickRT Mix                      12.5 μl      50 μl

     5×RT Buffer（For Real-time PCR）        55 μl       220 μl

     Primer Mix                            27.5 μl     110 μl

     dNTP Mix (2.5 mM Each)                55 μl       220 μl

     RNase-Free Water                       1 ml        1 ml

        本產品僅供科研使用，請勿用于臨床診斷及其他用途  

產品簡介

　　本產品是為Real-time  RT-PCR研發的快速逆轉錄試劑，其包含從RNA模板逆轉錄

成cDNA*鏈所需的全部試劑，優化的反應體系為快速逆轉錄酶提供更可靠的反應條

件。SuperQuickRT逆轉酶逆轉錄效率高，可對少量RNA模板進行良好的逆轉錄反應，

15分鐘即可完成熒光定量 PCR模板cDNA*鏈合成。另外，逆轉錄反應溫度可以提

高到50 oC，可通讀GC含量高和二級結構復雜的RNA模板。

產品特點

1．快速：42 oC，15min可完成cDNA*鏈合成。

2．反轉錄效率高：反轉錄效率高于90%。

3．靈敏度高：pg級模板也可以得到高質量的cDNA。

4．通讀復雜模板：GC含量高和二級結構復雜模板。

注意事項

1．在操作過程中應避免RNase污染，防止RNA降解或實驗中的交叉污染，建議操作人

   員帶口罩和一次性手套并經常更換手套，使用專門的儀器和耗材。

2．逆轉錄體系配制在冰上進行操作，防止RNA發生降解。試劑盒的酶使用后盡快置于

   -20 oC保存，并盡量避免反復凍融。

3．Primer Mix是由Oligo(dT)和random primer配制而成，也可根據實驗需要選用Oligo-dT

   Primer或Gene Specific Primer。

4．反應體系可倍比放大，10 μl反應體系可zui大使用1μg總RNA。

5．對于二級結構復雜的RNA模板，建議在操作步驟之前，將模板RNA在65℃孵育5min立刻置于冰上，短暫離心后進行下一步操作。

操作步驟

1．將模板RNA在冰上解凍；將試劑盒組分在室溫解凍后立刻置于冰上，使用前將每種

   溶液渦旋振蕩混勻，并經短暫離心后使用。

2．根據以下表格配制反應體系，渦旋震蕩混勻，短暫離心，使管壁上的溶液收集到管底。

試劑                10 μl反應體系           終濃度

dNTP Mix (2.5 mM Each)               2 μl          500 μM Each

Primer Mix                           1 μl

                         1）

RNA Template                         X μl         10 pg～1 μg2）

5×RT Buffer（for Real-time PCR）       2 μl              1×

SuperQuickRT Mix                    0.5 μl

RNase-Free Water                  up to 10 μl

   注意：1）根據實驗需要可使用Oligo-dT Primer或Gene Specific Primer，建議10 μl 反應體系加入Oligo-dT Primer 25 pmol，或Gene Specific Primer 2.5 pmol 。

   2）如果總RNA量大于1 μg，請按比例擴大反應體系。

3．42℃孵育15分鐘。

   注意：對于二級結構復雜或GC含量高的模板，可以提高逆轉錄溫度至50℃，增強逆轉錄效率。

4．85℃孵育5分鐘，使逆轉錄酶失活。

5．短暫離心后置于冰上，再進行后續Real-time PCR檢測，如果需要長時間保存，請

   置于-20℃。

   注意：進行Real-time PCR反應時，逆轉錄產物的加量應不超過PCR反應總體積的1/10。

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