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      己烯雌酚(DES)ELISA檢測試劑盒使用說明書

      提 供 商: 上海研謹生物科技有限公司 資料大小:
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      詳細介紹

      本試劑盒只能用于科學研究,不得用于醫學診斷

      己烯雌酚(DES)ELISA檢測試劑盒

      使用說明書

      檢測原理

      試劑盒采用競爭法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包己烯雌酚(DES抗原包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的競爭抗原,經過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的己烯雌酚(DES)相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。

      樣品收集、處理及保存方法

      1.  血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

      2.  血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉離心30分鐘取上清。

      3.  細胞上清液:3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

      4.  組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉離心10分鐘取上清。

      5.  保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

      自備物品

      1.酶標儀(450nm)

      2.高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

      3.37℃恒溫箱

      操作注意事項

      1.  試劑盒保存在2-8℃,使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶,這屬于正常現象,水浴加熱使結晶完全溶解后再使用。

      2.  實驗中不用的板條應立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。

      3.  按照說明書操作時樣本已經稀釋5倍,最終結果乘以5才是樣本實際濃度。

      4.  嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。

      5.  所有液體組分使用前充分搖勻。

      試劑盒組成

      名稱

      96孔配置

      48孔配置

      備注

      微孔酶標板

      12孔×8條

      12孔×4條

      標準品

      0.3mL*6管

      0.3mL*6管

      樣本稀釋液

      6mL

      3mL

      競爭抗原-HRP

      6mL

      3mL

      20×洗滌緩沖液

      25mL

      15mL

      按說明書進行稀釋

      底物A

      6mL

      3mL

      底物B

      6mL

      3mL

      終止液

      6mL

      3mL

      封板膜

      2張

      2張

      說明書

      1份

      1份

      自封袋

      1個

      1個

      注:標準品(S0-S5)濃度依次為:0、0.751.53612 ng/ml

      試劑的準備

      20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。

      洗板方法

      1.  手工洗板:甩盡孔內液體,每孔加滿洗滌液,靜置1min后甩盡孔內液體,在吸水紙上拍干,如此洗板5次。

      2.  自動洗板機:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。

      操作步驟

      1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。

      2.  設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;

      3.  樣本孔先加待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL;空白孔不加。

      4.  除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的競爭抗原50μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

      5.  棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。

      6.  每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

      7.  每孔加入終止液50μL,15min內,在450nm波長處測定各孔的OD值。

      結果判斷

      1. 15分鐘內在波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值;

      2. 百分結合率計算:設S0管計數為B0,各標準管或樣品管計數為B,非特異管計數為NSB,則百分結合率計算公式如下:B/B0=(B-NSB)/(B0-NSB)×100%

      3. logit計算:各標準點或樣品管的logit值計算公式如下:logit=ln(B/B0)/(1-B/B0)

      4. 將標準品的OD均值與標準品0點的OD均相除,為標準點的百分結合率,在log-logit坐標紙上繪圖。

      5. Log-logit雙對數標準曲線:坐標紙上橫軸從左至右第一個1-9表示為第一個10進位,第二個1-9表示為第二個10進位。第三個1-9表示為第三個10進位。坐標紙縱軸為百分比(1-99),即各標準吸光值的百分結合率。取一條通過各點的直線。要求盡可能多的點在線上,同時剩余的點均勻分布在直線的兩邊。樣品也同樣由吸光值計算百分結合率,再從縱軸上的相應結合率找到直線上的點,此點對應的橫坐標濃度即為樣品的濃度,無須換算。

      6. 人工處理:以標準濃度取log值為橫坐標,對應的logit值為縱坐標在普通坐標紙上或以標準濃度為橫坐標,對應的B/B0為縱坐標在logit-log坐標紙上畫出標準曲線(理想化時是一條直線)。根據待測樣

      品的B/B0可以從坐標紙上查出樣品的濃度值。如果使用普通坐標紙,查出的數值應取反對數才是最后的濃度值。

      7. 自動處理:使用logit-log或四參數數據處理模式,由電腦自動計算得出結果。

      8. 敏感度:1.0 ng/ml

      9. 圖例

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      試劑盒性能

      1. 準確性:標準品線性回歸與預期濃度相關系數R值,大于等于0.9900。

      2. 靈敏度:最DI檢測濃度小于0.1 ng/ml

      3. 特異性:不與其它可溶性結構類似物交叉反應。

      4. 重復性:板內、板間變異系數均小于15%。

      5. 貯藏:2-8℃,避光防潮保存。

      6. 有效期:6個月

      從2011年開始我們致力于在生命科學領域生物醫學實驗技術及論文潤色服務,協助客戶各類實驗服務及論文潤色十多年,是您值得信賴的科研合作伙伴!

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      實驗技術服務:




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