ELISAS實(shí)驗(yàn)血清的制備

（2）抗血清的制備

 ① 所需的抗原量   一般1-10mg/mL。

②免疫途徑   抗原的注射方法有皮下注射、肌肉注射、腹膜內(nèi)注射、靜脈注射和淋巴結(jié)注射等。其中以靜脈注射zui為簡單方便，不需要佐劑乳化，產(chǎn)生抗體的高峰值出現(xiàn)較早，一般在一周左右，注射后一周即可采血測試效價(jià)。免疫過程中應(yīng)注意：a.佐劑只能現(xiàn)配現(xiàn)用：b.采血時(shí)間不宜拖得太長。因?yàn)槊庖邥r(shí)間越長，產(chǎn)生交叉反應(yīng)的抗體也越多。

③抗血清的分離   當(dāng)?shù)玫綕M意的效價(jià)時(shí)，即可進(jìn)行取血。將收集到的血液成斜面放置在37℃、溫箱中2h。然后置于4℃冰箱過一夜。次日用滴管吸取抗血清，用離心法（2000-3000r/min,20min）去掉沉淀。然后測定效價(jià)、鑒定純度。純度用紫外分光光度計(jì)或Folin氏比色法進(jìn)行測定。抗血清保存于-25℃低溫處。

 ④抗血清的效價(jià)測定    測定的方法一般有兩種，即試管沉淀法和免疫雙擴(kuò)散法。對(duì)于免疫酶技術(shù)使用的抗血清，必須具有一定的效價(jià)，試管沉淀法應(yīng)不低于1:2，免疫雙擴(kuò)散法不低于1:2，且要求單價(jià)抗血清。

 （3）捕食者的收集和準(zhǔn)備     主要方法有3個(gè)：①將胃內(nèi)含物擠在質(zhì)量好的濾紙上，但蛋白質(zhì)易與纖維素結(jié)合，若保存過久則難以洗脫：②將待檢查的捕食封閉在明膠膠囊內(nèi)，并加干燥劑，以使蟲體與膠囊分離：③盡可能快地將采集到的捕食者儲(chǔ)存于低溫下（如-40℃）。前兩種方法適于郵寄和長途運(yùn)輸，后一種方法能保存較長的時(shí)間。所有的方法都需保持干燥。對(duì)較大的捕食者，可將消化道分離，像蟻、蝸牛以及蜘蛛等小型動(dòng)物則整個(gè)蟲體。（4）酶聯(lián)抗體的制備  按戊二醛簡易法進(jìn)行。