兔出血癥病毒抗體elisa檢測試劑盒
出血癥病毒抗體本試劑盒用于測定兔血清，血漿及相關液體樣本中出血癥病毒抗體。
實驗原理：
    本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯免疫法(ELISA )測定標本中兔出血癥病毒抗體。用純化
的兔出血癥病毒抗原包被微孔板，制成固相抗原，可與樣品中出血癥病毒抗體相結合，經洗
滌除去未結合的抗體和其他成分后，再與HRP 標記的兔出血癥病毒抗原結合，形成抗原-抗體-酶標抗原復合物，經過*洗滌后加底物 TMB顯色。TMB在HRP 酶的催化下轉化成
藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD值)，
與CUTOFF 值相比較，從而判定標本中兔出血癥病毒抗體的存在與否。
出血癥病毒抗體試劑盒組成：
試劑盒組成 48孔配置 96孔配置 保存
說明書 1 份 1 份
封板膜 2 片(48) 2 片(96)
密封袋 1 個 1 個
酶標包被板 1×48 1×96 2-8℃保存
陰性對照 0.5ml×1 瓶 0.5ml×1 瓶 2-8℃保存
陽性對照 0.5ml×1 瓶 0.5ml×1 瓶 2-8℃保存
酶標試劑 3 ml ×1 瓶 6 ml ×1 瓶 2-8℃保存
樣品稀釋液 3 ml ×1 瓶 6 ml ×1 瓶 2-8℃保存
顯色劑A 液 3 ml ×1 瓶 6 ml ×1 瓶 2-8℃保存
顯色劑B 液 3 ml ×1 瓶 6 ml ×1 瓶 2-8℃保存
終止液 3ml ×1 瓶 6ml ×1 瓶 2-8℃保存
濃縮洗滌液 (20ml×20倍)×1 瓶 (20ml×30倍)×1 瓶 2-8℃保存
出血癥病毒抗體樣本處理及要求：
1. 血清：室溫血液自然凝固 10-20 分鐘，離心 20分鐘左右(2000-3000 轉/分)。仔細收集上
清，保存過程中如出現沉淀，應再次離心。
2. 血漿：應根據標本的要求選擇 EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合 10-20 分鐘后，離心
20分鐘左右(2000-3000 轉/分)。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應該再次
離心。
3. 尿液：用無菌管收集，離心 20分鐘左右(2000-3000 轉/分)。仔細收集上清，保存過程
中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
4. 細胞培養上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心 20分鐘左右(2000-3000 轉/
2
分)。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時，用PBS (PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液，細胞
濃度達到100 萬/ml 左右。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心 20分
鐘左右(2000-3000 轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
5. 組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS ，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備
用。標本融化后仍然保持 2-8℃的溫度。加入一定量的 PBS (PH7.4)，用手工或勻漿器
將標本勻漿充分。離心 20分鐘左右(2000-3000 轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待
檢測，其余冷凍備用。
6. 標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上
進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融.
7. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP )活性。
出血癥病毒抗體操作步驟：
1. 編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰性對照 2 孔、陽性對照 2 孔、空白對照 1
孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同)
2. 加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl 。然后在待測樣品孔先
加樣品稀釋液 40μl ，然后再加待測樣品 10μl 。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不
觸及孔壁，輕輕晃動混勻，
3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育30 分鐘。    
4. 配液：將30(48T 的20倍)倍濃縮洗滌液加蒸餾水至 600ml 后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30秒后棄去，如此
重復5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑 50μl ，空白孔除外。
7. 溫育：操作同 3。
8. 洗滌：操作同 5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A 50 μl ，再加入顯色劑 B 50 μl ，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15分鐘
10. 終止：每孔加終止液 50μl ，終止反應(此時藍色立轉黃色)。
11. 測定：以空白空調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止
液后15分鐘以內進行。
結果判定：
試驗有效性：陽性對照孔平均值≥1.00;  陰性對照平均值≤0.15
    臨界值(CUT OFF)計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.20
    陰性判定：樣品 OD值< 臨界值(CUT OFF)者為兔出血癥病毒抗體陰性
    陽性判定：樣品 OD值≥ 臨界值(CUT OFF)者為兔出血癥病毒抗體陽性
出血癥病毒抗體注意事項
1．操作嚴格按照說明書進行，本試劑不同批號組分不得混用。
2．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未
用完，板條應裝入密封袋中保存。
3．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
4．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
5．底物請避光保存。
6．試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準，使用雙波長檢測時，參考波長為 630nm
7．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液為 2M 的流酸，使用時必須
3
注意安全。
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6 個月