細(xì)胞熒光染料標(biāo)記檢測實(shí)驗(yàn)

Zenon⑧標(biāo)記技術(shù)為制備熒光標(biāo)記抗體提供了一種快速、通用且可靠的實(shí)驗(yàn)方法，此標(biāo)記方法可利用各種熒光染料，并且起始原料可以為極少量、未純化(如雜交瘤細(xì)胞的培養(yǎng)上清液)的抗體。利用Zenon@標(biāo)記技術(shù)標(biāo)記的抗體適用于所有可使用直標(biāo)抗體的應(yīng)用領(lǐng)域。Zenon@ 標(biāo)記技術(shù)的優(yōu)勢包括:

●10分鐘貼記時間

●每個標(biāo)記1- 20微克抗體

●與BSA及其它穩(wěn)定蛋白相容

●無純化步驟.

●靈活的抗體標(biāo)

Zenon⑧-標(biāo)記技術(shù)如何工作

Zenon@標(biāo)記技術(shù)提供一種多功能的、 易于使用的方法，用于標(biāo)記人和小鼠的IgG1, lgG2a和lgG2b抗體及兔gG抗體。特殊設(shè)計(jì)的Zenon@片段只結(jié)合一 抗的Fc片段， 這種快速、非共價(jià)結(jié)合方法能夠迅速標(biāo)記少量的一抗(圖1) Zenon@標(biāo)記技術(shù)簡單高效;整個標(biāo)記步驟只需10分鐘。

Zenon@抗體偶聯(lián)物形成后可以穩(wěn)定地儲存待用;在使用前需要添加非特異性lgG來封閉未結(jié)合的Zenon⑨片段，無需柱純化。Zenon@復(fù) 合物因而可直接應(yīng)用到樣品中。

Zenon@標(biāo)記技術(shù)標(biāo)記的抗體與觀察到的直接標(biāo)記的抗體偶聯(lián)物呈現(xiàn)相似的熒光強(qiáng)度或酶活性(圖2 )。

圖1. Zenon@標(biāo)記技術(shù)工作原理。Zenon@抗體的非共價(jià)標(biāo)記與微量標(biāo)記試劑盒、 單克隆標(biāo)記試劑盒、蛋白標(biāo)記試劑盒的共價(jià)標(biāo)記比較。

圖2. Zenon@標(biāo)記技術(shù)生產(chǎn)出的標(biāo)記抗體的高度相當(dāng)于或者比直接標(biāo)記的抗體更高。使用別藻藍(lán)蛋白(APC) 共軛標(biāo)記或者使用1微克Zenon⑨APC復(fù)合物非共軛標(biāo)記各種淋巴標(biāo)志物抗體。然后,標(biāo)記的抗

體用于人外周血淋巴細(xì)胞樣品的染色。制備Zenon@染色復(fù)臺物時，通過提高Zenon@標(biāo)記技術(shù)試劑與所用一級抗體的比例可進(jìn)一步提高該復(fù)合物的亮度。

Zenon@標(biāo)記技術(shù):終標(biāo)記靈活性

當(dāng)您需要改變標(biāo)記物顏色或者檢測特定熒光是否適合您的應(yīng)用或抗體時，Zenon@標(biāo)記技術(shù)可提供*的標(biāo)記靈活性。可廣 泛選擇的標(biāo)記物、通用的標(biāo)記技術(shù)，助您在流式細(xì)胞術(shù)(圖3 )和熒光成像(圖4和5 )中輕松獲得不同顏色組合成的多色應(yīng)用圖像。

圖3.在流式細(xì)胞術(shù)中使用Zenon⑧標(biāo)記技術(shù)。人外周血白細(xì)胞以下列三種抗體染色:預(yù)先經(jīng)Zenon⑧ Alexa Fluor@ 647小鼠IgG1標(biāo)記試劑盒( Z25008)標(biāo)記的抗CD3小鼠gG1抗體( A21330 )、預(yù)先經(jīng)Zenon⑨R藻紅蛋白小鼠IgG1標(biāo)記試劑盒(Z25055 )標(biāo)記的抗CD4小鼠gG1抗體(A21334)和預(yù)先經(jīng)Zenon⑧Alexa Fluor@488小鼠lgG2a標(biāo)記試劑盒( Z25102 )標(biāo)記的抗CD8小鼠lgG2a抗體(A21338 )。圖A和圖B顯示:分別區(qū)別橙色熒光信號與綠色熒光信號或者紅色熒光信號與橙色熒光信號，可以將細(xì)胞進(jìn)行區(qū)分，證明Zenon@標(biāo)記的抗體在同一樣品中不會互相干擾。分析樣品所用儀器及設(shè)置為: Coulter Elite流式細(xì)胞儀，針對藻紅蛋白和Alexa Fluor@488染料使用488 nm激發(fā)光，針對AlexaFluor⑧647染料使用633 nm激發(fā)光。

圖4.在熒光成像中使用Zenon@標(biāo)記技術(shù)。

切取厚度為14 μm的小鼠海馬冠狀切片，應(yīng).用Zenon⑧Alexa Fluor@ 488小鼠gG1標(biāo)記試劑盒( Z25002 )標(biāo)記的抗a-微管伯抗體( A11126)染色。切片用NeuroTrace⑨530/615紅色熒光Nissl染料( N21482 )復(fù)染來觀察神經(jīng)元胞體，用Hoechst 33258 ( H1398，H3569,H21491 )染色來觀察細(xì)胞核。

圖5.在熒光成像中使用Zenon@標(biāo)記技術(shù)。

微管蛋白和線粒體探針標(biāo)記的牛肺動脈內(nèi)皮細(xì)胞微管蛋白采用Zenon@ Alexa Fluor@488小鼠lgG2b標(biāo)記試劑盒( Z25202 )標(biāo)記的抗a-微管蛋白小鼠IgG2b單克隆抗體檢測，線粒體采用Zenon⑨Alexa Fluor@ 555小鼠lgG2b標(biāo)記試劑盒( Z25205 )標(biāo)記抗氧化磷酸化酶復(fù)合體V亞單位a小鼠lgG2b單克隆抗體( A21350 )檢測。使用DAPI(D1306，D3571, D21490 )給核酸染色。

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